Η Πηνελόπη Αναστασοπούλου σπούδασε στο Θέατρο Τέχνης – Κάρολος Κουν, ενώ έχει παρακολουθήσει σεμινάρια υποκριτικής με την Λυδία Κονιόρδου και τον Κώστα Γεωργουσόπουλο. Έχει παρακολουθήσει μαθήματα χορού, κλασικής κιθάρας και κλασικού μπαλέτου. Θεατρικά την έχουμε δει στις παραστάσεις, «Μεγάλο και μικρό» (2002), «Ο ύμνος στους θεούς ας πάει», μουσική παράσταση αφιέρωμα στον Μ. Χατζιδάκι (2003), «Μια φορά κι ένα…λεπτό» (2003), «Η βασίλισσα του χιονιού», του Χ. Κ. Άντερσεν (2003), «Η Όπερα της πεντάρας» (2005-2006), «Διαμάντια και Μπλουζ» (2006-2007), «Απόπειρες» (2008), «Σεσουάρ για δολοφόνους» (2008-2010). Τηλεοπτικά την έχουμε δει στις σειρές «7 Θανάσιμες Πεθερές» (Mega), Οι Μάγισσες της Σμύρνης (Mega), Ήρθε κι Έδεσε (Mega), Big Bang (Mega), Όλα στον Αέρα (Mega), Μ+Μ (Mega). Το ντεμπούτο της στον κινηματογράφο έγινε με τις ταινίες «Αγάπη Τρυφερή» και «Άμα Δε Σε Θέλει», το 2008.